1. 頸椎脫臼法處死SD大鼠。

2. 剃去背毛，75%酒精浸泡5min。

3. 從尾椎處剪開皮膚，取出腰椎。

4. 盡量剔除附著的肌肉，用含2%雙抗的PBS沖洗3-5次。

5. 分離椎節(jié)，切開纖維環(huán)分離凝膠狀髓核，將凝膠狀髓核置于PBS中沖洗 3 次，去除血跡，剪碎髓核組織呈 1mm³大小，移至離心管后加入5倍體積的1.5%Ⅱ型膠原酶，37℃搖床消化2h。

6. 消化結束 ，20%FBS終止消化，100um濾網(wǎng)過濾，1000r/min 離心 5min，棄上清后DMEM/F12 重懸，按 1×10⁵ /ml接種于培養(yǎng)板，加入含1%雙抗和 15% FBS 的 DMEM/F12，置于 37 ℃細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

7. 4 d后首次換液，以后每3天換換液 1 次，細胞達 90% 融合后傳代